โครมาโตกราฟีแบบชั้นบางเป็นวิธีการวิเคราะห์ทางเคมีโดยใช้ชั้นดูดซับที่มีความหนา 0.1-0.5 มม. เป็นเฟสอยู่กับที่ วิธี TLC สามารถใช้ได้ในด้านต่างๆ และช่วยให้สามารถกำหนดสารประกอบทางเคมีได้หลากหลาย
หลักการวิธีการ
วิธีการของโครมาโตกราฟีแบบชั้นบางเกิดขึ้นจากโครมาโตกราฟีแบบกระดาษและทำการทดลองครั้งแรกในช่วงทศวรรษที่ 80 ของศตวรรษที่ 19 การใช้งานการวิเคราะห์นี้เริ่มขึ้นหลังจากปี 1938 เท่านั้น
เทคนิค TLC รวมถึงเฟสเคลื่อนที่ (ตัวชะ) เฟสที่อยู่กับที่ (ตัวดูดซับ) และตัววิเคราะห์ เฟสอยู่กับที่ถูกนำไปใช้และยึดติดกับจานพิเศษ แผ่นสามารถทำจากแก้ว อะลูมิเนียม หรือพลาสติก ซึ่งเป็นพื้นผิวที่นำกลับมาใช้ใหม่ได้ ซึ่งต้องล้างให้สะอาด ตากให้แห้ง และเตรียมให้พร้อมสำหรับการใช้ตัวดูดซับหลังการใช้งานแต่ละครั้ง นอกจากนี้ยังสามารถใช้แผ่นกระดาษที่ทิ้งหลังการใช้งานได้อีกด้วย
ส่วนใหญ่มักใช้ซิลิกาเจลเป็นเฟสอยู่กับที่ แต่สามารถใช้ตัวดูดซับอื่นๆ เช่น อะลูมิเนียมออกไซด์ได้ เมื่อใช้ตัวดูดซับนี้หรือตัวดูดซับนั้น เทคโนโลยีจะต้องปฏิบัติตามอย่างเคร่งครัดเพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่แม่นยำ เช่น เนื่องจากซิลิกาเจลสามารถให้ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้องได้หากอากาศในห้องปฏิบัติการชื้นเกินไป
ตัวทำละลายถูกใช้เป็นเฟสเคลื่อนที่ เช่น น้ำ กรดอะซิติก เอทานอล อะซิโตน เบนซิน การเลือกตัวทำละลายต้องดำเนินการอย่างรับผิดชอบ เพราะผลลัพธ์ของโครมาโตกราฟีขึ้นอยู่กับคุณภาพของมันโดยตรง (ความหนืด ความหนาแน่น ความบริสุทธิ์) ตัวทำละลายแต่ละตัวถูกเลือกสำหรับตัวอย่างที่วิเคราะห์แต่ละตัวอย่าง
การวิเคราะห์
ตัวอย่างต้องเจือจางในตัวทำละลาย หากการละลายไม่หมดและมีสิ่งเจือปนเหลืออยู่มากเกินไป สามารถทำความสะอาดตัวอย่างได้โดยการสกัด
การนำตัวอย่างไปใช้กับเพลทสามารถทำได้โดยอัตโนมัติหรือด้วยตนเอง การใช้งานอัตโนมัติใช้วิธีไมโครสเปรย์ โดยจะพ่นตัวอย่างแต่ละตัวอย่างลงในพื้นที่ที่เหมาะสมของพื้นผิว สำหรับการใช้งานด้วยตนเองจะใช้ไมโครปิเปต เครื่องหมายดินสอถูกวางบนจานสำหรับแต่ละตัวอย่าง แต่ละตัวอย่างถูกนำไปใช้กับจานด้วยเส้นเลือดฝอยในหนึ่งบรรทัดที่ระยะห่างเพียงพอจากเครื่องหมายเพื่อไม่ให้ทำปฏิกิริยากับคาร์บอนจากตะกั่ว
จานวางอยู่ในภาชนะที่ด้านล่างของสารชะ การสนับสนุนถูกวางไว้โดยขอบด้านหนึ่งเข้าไปในเรือจนถึงเส้นที่ทำเครื่องหมายไว้ ปิดภาชนะให้แน่นเพื่อหลีกเลี่ยงการระเหยของเฟสเคลื่อนที่ ภายใต้การกระทำของแรงของเส้นเลือดฝอย สารชะจะเริ่มลอยขึ้นชั้นดูดซับ เมื่อสารชะถึงระดับหนึ่ง เพลทจะถูกลบออกจากภาชนะและทำให้แห้ง
หากสารที่ต้องการไม่มีสีก็จะมองไม่เห็นบนพื้นผิว ดังนั้นจึงทำการสร้างภาพ - การประมวลผลแผ่นด้วยไอไอโอดีนหรือสีย้อมอื่น ๆ
หลังจากการประมวลผลดังกล่าว ผลลัพธ์จะถูกประเมิน บริเวณสีที่มีความเข้มต่างกันจะปรากฏบนตัวดูดซับ ในการพิจารณาสาร (หรือกลุ่มของสาร) พื้นที่ที่มีสี ขนาด ความเข้ม และการเคลื่อนที่จะถูกนำมาเปรียบเทียบกับตัวอย่างอ้างอิง
วิธี TLC มีการใช้กันอย่างแพร่หลาย เนื่องจากเป็นวิธีที่รวดเร็ว ราคาถูก แม่นยำ ใช้งานง่าย ไม่ต้องใช้อุปกรณ์ที่ซับซ้อน และง่ายต่อการตีความ